您好,今天小怡来为大家解答以上的问题。hanks液相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！

hanks液(hanks液的成分)

hanks液(hanks液的成分)

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1、平衡盐溶液博凌科为生物科技-为你解答：用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞： 1．制备AET-绵羊红细胞： 1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500g 10分钟。

2、 2）吸净上清液，测量红细胞比容。

3、轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。

4、室温中反应30分钟。

5、 3）用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤AET-绵羊红细胞5次，每次离心500g，10分 钟。

6、用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞悬浮至10％（v/v）浓度。

7、10％ AET-绵羊红细胞悬液可在4℃保存三周。

8、 2．用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞（Ficoll分离法）： 1）用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液将单个核细胞悬浮至107/ml， 加入1/10~1/20量的10％ AET-绵羊红细胞悬液。

9、混合后，室温放置1小时。

10、离心500g 10分钟，4℃过夜。

11、 2）吸去上清液，用手轻轻旋转离心管，使细胞悬浮，不要用吸管吹打。

12、加入同样培养液至原容量。

13、 3）将细胞悬液小心加在半量淋巴细胞分离液上，室温中水平离心500g 20分钟。

14、 4）吸弃上层无细胞液体，将细胞培养液和淋巴细胞分离液交界面的细胞和约85％的淋巴细胞分离液吸出，置另一离心管中。

15、交界面的即E－细胞，立即向该细胞悬液中加等量洗涤液，离心500g 10分钟，去上清液；再用洗涤液同样洗涤2次，除去淋巴细胞分离液，以备进一步分离B淋巴细胞和单核细胞。

16、/P p 5）分离E＋细胞：吸出剩余液体，用10倍量Geys液悬浮沉淀细胞1～2分钟，低渗溶解红细胞。

17、立即加入同量两倍浓缩的 PBS，恢复等渗。

18、离心500g 10分钟，去上清液。

19、再用RPMI-1640培养液同样洗涤2次。

20、此即E＋细胞。

21、用1％台盼蓝 染色法测定细胞浓度和细胞活力，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞悬浮至适当浓度。

22、 3．用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞（Percoll分离法）： 制备Percoll密度梯度： 1）将1份10倍浓缩的PBS与9份Percoll混合，得到等渗的Percoll溶液，比重应是1.127。

23、 2）稀释液（含25mmol/L Hepes, 10%小牛血清的RPMI-1640纱布、注射器和针头培养液）的比重约1.008左右。

24、按下式配制不同比重的Percoll溶液：％ Percoll＝（所需比重－稀释液比重）/（等渗Percoll溶液比重－稀释液比重）100 分离E＋细胞： 1）取10ml 5106/ml的单个核细胞置离心管中，加2.5ml 10％ AET-绵羊红细胞和1ml小牛血清，混合后，20℃离心200g 15分钟，确定没有悬浮的红细胞，冰浴60分钟或过夜。

25、 2）轻轻旋转离心管，使细胞悬浮。

26、注意不要用吸管吹打，吹打会打散一些玫瑰花结。

27、将细胞悬液小心加在7～8ml Percoll溶液上，室温中水平离心50抗凝剂0g 20分钟。

28、/P p 3）吸弃上层无细胞液体，将交界面的细胞和约85％的Percoll溶液吸出，置另一离心管中。

本文到这结束，希望上面文章对大家有所帮助。